| 更新時間： | 2021-01-13 |
| 訪問量： | 1218 |
| 廠商性質(zhì)： | 生產(chǎn)廠家 |
提供商: 上海研謹生物服務(wù)名稱: 斑點雜交實驗服務(wù)實驗注意事項規(guī)格: 實驗服務(wù) 價格： 2000元
斑點雜交實驗服務(wù)實驗注意事項
實驗技術(shù)簡介:斑點雜交(Dotblot) 是將被檢標(biāo)本點到膜上，烘烤固定。這種方法耗時短，可做半定量分析。- 張膜上可同時檢測多個樣品，為使點樣準確方便，市售有多種多管吸印儀(Manifold) , 如MinifoldI和II. Smart Botter(Wealtec).Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot,它們有許多孔，樣品加到孔中，在負壓下就會流到膜上呈斑點狀或狹縫狀。反復(fù)沖洗進樣孔，取出膜烤干或紫外線照射以固定標(biāo)本，這時的膜就可以進行雜交。
實驗技術(shù)原理:
斑點雜交是指將待測的DNA變性后點加在硝酸纖維素膜(或尼龍膜、NC膜)上, 用已標(biāo)記的探針進行雜交，洗膜(除去未接合的探針)， 放射自顯影，判斷是否有雜交及其雜交強度，主要用于基因缺失或拷貝數(shù)改變的檢測。
實驗操作流程:
1. DNA斑點雜交
①先將膜在水中浸濕，再放到15*SSC中。
②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min,冰中速冷。
③用鉛筆在濾膜上標(biāo)好位置將DNA點樣于膜上，每個樣品-般點5ul(2~10μg DNA)。
④將膜烘干，密封保存?zhèn)溆谩?/span>
2、RNA斑點雜交
與上法類似、，每個樣品至多加10μg總RNA (經(jīng)酚/氨0仿或異硫青酸胍提取純化)。 方法是將RNA溶于5μl DEPC水，加5μI甲醛/SSC緩沖液(10*SSC中含6.15moI/L甲醛) ，使RNA變性，然后取5-8μI點樣于處理好的濾膜上，烘干。
3、完整細胞斑點雜交
應(yīng)用類似檢測細菌菌落的方法，可以對細胞培養(yǎng)物的特異序列進行快速檢測，將整個細胞點到膜上，經(jīng)NaOH處理，使DNA暴露、變性和固定，再按常規(guī)方法進行雜交與檢測。有人曾用此法從105個培養(yǎng)細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點印跡法可以用于篩選大量標(biāo)本，因為它使細胞直接在膜上溶解，所以DNA含量甚至比常用的提取法還高，又不影響與32P標(biāo)記的探針雜交，但它不適用于非放射性標(biāo)記探針，因為DNA純度不夠，會產(chǎn)生高本底。
實驗注意事項:
客戶提供:
TotalRNA (DNA) ≥20ug,濃度> 1ug/ul, A260/A280>1.8;提供標(biāo)記后的探針，需同時告知標(biāo)記后探針的濃度及活性，待檢測目的基因的Genbank序列號。
交付標(biāo)準:
1、圖片
2.完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實驗結(jié)果)
其他:
1.點樣量不要太大，否則雜交后，X光片上點太大，互相影響。
點樣前尼龍膜無需預(yù)處理，點樣后自然晾干后， 分別在變性液和中和液中進行變性和中和。
收費標(biāo)準/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
更多實驗技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詳詢!
實驗代做服務(wù)：
免疫組化IHC染色實驗服務(wù) | 細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務(wù) | 試劑盒免費代檢測 | 實驗室代做實驗項目
|
透射電鏡服務(wù)實驗服務(wù) | 石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡 | 核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務(wù) | 免疫共沉淀（CHIRP）實驗 |
RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀（RIP）實驗代做 | 酶聯(lián)免疫（ELISA）技術(shù)服務(wù) | 雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒 | 喹諾酮類快速檢測試劑盒 |
組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)
| 染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務(wù)
| 多因子液相芯片技術(shù)（Luminex）實驗 | 免疫細胞化學(xué)ICC實驗服務(wù) |
ATP/ADP檢測實驗服務(wù) | 蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務(wù) | 蛋白相互作用分析 | 堿性磷酸酶染色實驗服務(wù) |
PKC活性檢測實驗 | 非標(biāo)定量實驗 （Label-free）
| DIGE技術(shù)實驗服務(wù) | 端粒酶活性檢測實驗 |
細胞生長曲線的測定 | 掃描電鏡服務(wù) | NF-KB p65活性檢測實驗
| 慢病毒包裝實驗服務(wù) |
