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土壤脲酶 (S-UE) 活性檢測試劑盒說明書
點擊次數(shù):592 更新時間:2023-10-11

壤脲酶 (S-UE) 活性檢測試劑盒說明書

量法

意:正式測定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

規(guī)格:100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容

試劑一: 甲苯2mL×1  瓶,4℃保存;  (自備)

劑二:粉劑×1  瓶,臨用前加入9mL  蒸餾水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的試劑4℃保 ;

三:液體19mL×1  瓶,4℃保存;

劑四A  液:液體0.4mL×1  支,4℃保存;

試劑四B  液:液體1.6mL×1  瓶,4℃保存;臨用前將A  液倒入B  液中混合,待用;用不完的試 4℃保存一周;

五:液體 2mL×1  瓶,4℃保存;

標準品:液體 1mL×1 支,1mg/mL 氮標準液。

產(chǎn)品說明:

S-UE水解尿素,產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機物質(zhì)含量、

全氮和速效氮含量呈正相關(guān)。土壤脲酶活性反應(yīng)了土壤的氮素狀況。利用靛酚藍比色法測定脲酶 尿素產(chǎn)生的NH3-N。

自備的儀器和用品:

可見分光光/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96  孔板、研缽、冰、甲苯 (不允許快遞) 和蒸餾水。

作步驟:

a.    培養(yǎng)


定管

對照管

風(fēng)干土樣(g)

0.05

0.05

劑一 (μL)

20

20

混勻,使土樣全部濕潤,室溫放置 15min

劑二 (μL)

90


餾水 (μL)


90

劑三 (μL)

190

190

混勻, 37℃水浴培養(yǎng) 24h  后, 10000g  常溫離心 10min ,取上清液。

b.    培養(yǎng)結(jié)束的上清液稀釋10 (取0. 1mL  上清液,加入0.9mL  蒸餾水) 。若最終計算得到的 ΔA仍大于0.5繼續(xù)稀釋。

c.     標準品的準備:吸取適量的標準溶液,稀釋至10 、8 6 、4 、2 、1 、0.5 、0μg/mL。


d.    測氨量 (在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入下列試劑)


定管

對照管

準管

釋后的上清液 (μL) /標準品

80

80

80

劑四 (μL)

15

15

15

劑五 (μL)

15

15

15

分混勻,室溫放置 20min

餾水 (μL)

90

90

90

混勻,于 630nm 處,蒸餾水調(diào)零,讀吸光值 A ,計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一 個對照管。準曲線的建立:根據(jù)標準管的濃度 (y) 和吸光度 ( x,減去濃度為 0 的空白管) ,做標 準曲線。

酶活力計算

據(jù)標準曲線,將ΔA帶入公式 (x ) 計算測定中樣品的濃度 (μg/mL) y值。 的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生gNH3-N定義為一個酶活力單位。

脲酶活力 (U/g  土樣) =y×10×V反總÷W÷T=60×y

10:稀釋倍數(shù);T :反應(yīng)時間,1d;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.3mL;W:樣本質(zhì)量,0.05g。

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